有。
在缅甸的一块琥珀里发现了大约 1 亿年前（白垩纪）的一只雄性萤火虫，有明显的发光器结构。
对比一下现代萤火虫，左雄右雌，腹部白色的是发光器：
窗萤雄虫发光器发光：
这个化石证据可以证明一亿年前已经有可以发光的萤火了，至于发的光是什么样的，比如什么颜色、亮度、以某种频率还是持续发光，它就不能提供了。
颜色方面，是可以根据现存物种分析的。萤火虫发的光的颜色是荧光素酶决定的，基于其演变的规律，可以推断祖先分子的序列（祖先序列重建）与其产生的性状（祖先性状重建）[1]。
根据现存物种的分子序列可以推断出各种结点出现的年代。
上面琥珀里那只萤火虫所在的时间范围内荧光素酶 Canth 比现在成虫的光颜色偏黄。（图片有色差，看见的颜色和这篇论文里照片的颜色、其他照片里的颜色有差异）
发光活性（luminescence activity）比现在差一些。
至于发光频率则很难研究了，不过可以从发光的作用反过来推断。
自然界中，可以发光的昆虫不止萤火虫一种，
比如一些叩头虫也会发光
很多昆虫的幼虫也会发光，除了一些萤火虫、叩头虫的幼虫会发光，其他著名的比如发光蕈蚊的幼虫
当然，抛开昆虫之外，能发光的生物还有很多
（铁道虫是英语的直译，指雌光萤）
他们发光的原因很多，有
- 警告，提示自己有毒（虽然可能没有）
- 诱捕，吸引趋光的生物供自己捕食
- 求偶
比如一些萤火虫雄成虫会按照一定频率闪烁发光，而雌成虫持续发光，这样就能区分不同物种（闪烁频率不同）、不同性别（闪烁与持续发光）的萤火虫。
幼虫和蛹持续发光，显然不是为了交配，而是警告的信号，他们身体里通常含有毒素（萤火虫幼虫捕食的蜗牛 / 螺、蚯蚓，应该不能用发光吸引，所以应该也不是为了捕食）。
早期的萤火虫，卵、幼虫、蛹、成虫的发光可能都有警告的含义在，而上述琥珀里那只萤火虫发光器的位置与现在萤火虫相似，暗示可能已经具有求偶的用途了（论文说的，我没感觉出来）。
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